重組牛腸激酶(rb-EK)：重組蛋白的產(chǎn)生是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng)：原核蛋白表達(dá)，哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)，酵母蛋白表達(dá)及昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)。生產(chǎn)的蛋白在活性和應(yīng)用方法方面均有所不同。根據(jù)自身的下游運(yùn)用選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，提高表達(dá)成功率。

高特異性

1）特定的蛋白酶，切割前面含有四個(gè)天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點(diǎn)：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (DDDDK)

2）不含其他蛋白酶,無非特異性切割

圖一：SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果，純化的腸激酶一個(gè)單一的主帶

圖二：0.1U的EK作用于50µg底物0min,10 min,20 min,30 min,40 min,50 min,60 min后的SDS-PAGE分析

活性：1U定義：在25℃，12h~16h之內(nèi)，將0.50mg融合蛋白在25mM Tris-HCl8.0緩沖液中切割95%所需的酶量。

酶切條件：按照酶活性定義，重組EK酶切條件舉例：25mM Tris-HCl 8.0體系中：

融合蛋白濃度        0.1-1mg/ml （蛋白總量0.50-1.0mg）

重組EK用量          1.0-2.0U

溫度                       25℃過夜酶切，或完全酶切需12h-16h。

常見影響腸激酶活性的因素：在＞200mM 咪唑，或＞200mM NaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響?？蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切：

1）為獲得理想酶切結(jié)果，請(qǐng)將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進(jìn)行酶切。

2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切0.5mg蛋白）。

3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時(shí)適當(dāng)增加酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間，也可達(dá)到較好酶切效果。

穩(wěn)定性：可以在常溫下運(yùn)輸，在37℃，可穩(wěn)定保存一周。

酶液可反復(fù)凍融數(shù)次，對(duì)酶活無影響。

來源及用途：本產(chǎn)品來源于重組大腸桿菌，用于去除位于蛋白質(zhì)N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光防潮密閉干燥。

運(yùn)輸條件：2~8℃運(yùn)輸

重組牛腸激酶(rb-EK)