RIPA裂解液(強)科研實驗使用
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用。根據(jù)其裂解液的強度不同，大致可以分為強、中、弱三類。
本品為裂解強度相對較強的RIPA裂解液（強），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實驗。
組織樣品
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
【注】RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等復合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
組織樣品
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
【注】RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等復合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
注意事項
1）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
2） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（Cat NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
上一篇 : 阿利新藍染色液使用小竅門
在線咨詢